胃癌诊断中辅以血清G17、TK1联合检测的价值

高伟、李伟伟、张明明、赵培、于悦卿、耿瑞丽、帖彦清

【摘要】目的探讨血清胃泌素17(gastrin17，G17)、胸苷激酶1(thymidine kinase 1, TK1)联合检测在胃癌诊断中的应用价值。方法选择2018年3月至2019年3月收治的50例胃癌患者(胃癌组)、50例慢性胃溃疡患者(胃溃疡组)、50例慢性胃炎患者(胃炎组)和50例正常人(对照组)作为研究对象，采用酶联免疫吸附法检测空腹血清G17水平，采用化学发光结合斑点杂交法检测血清TK1水平。比较4组血清G17和TK1水平差异。采用受试者工作特征(receiver operating characteristic, RO)曲线评估血清G17和TK1水平单独与联合检测对胃癌的诊断效能。结果胃癌组患者血清G17和TK1水平显著高于其他3组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果，血清G17水平与TK1水平呈显著正相关(P<0.05)。血清G17和TK1水平诊断胃癌的ROC曲线的AUC分别为0.886(95%CI：0.839～0.934)、0.890(95%CI：0.850～0.930)、0.872(95CI：0.807～0.936)。血清G17和TK1诊断胃癌的最佳阈值分别为15.63pmol/L和2.10pmol/L，灵敏度分别为82.0%和68.0%、特异度分别为78.7%和94.7%，符合率分别为79.5%和88.0%，阳性预测值分别为56.2%和81.0%，阴性预测值分别为56.2%和89.9%。血清G17和TK1水平联合诊断胃癌的灵敏度、特异度、符合率、阳性预测值和阴性预测值分别为86.0%、96.0%、93.5%、87.7%和95.4%。结论血清G17和TK1水平是胃癌诊断的良好指标，两者联合能够提高胃癌诊断效能，值得临床推广应用。

【关键词】胃肿瘤；胃泌素17；胸苷激酶1；诊断；受试者工作特征曲线；

The value of combined detection of serum G17 and TK1 in diagnosis of gastric cancer
GAO Wei LI Weiwei ZHANG Mingmin*,et al.*Department of Clinical Laboratory,Hebei Provincial People’s Hospital,Hebei,Shijiazhuang 050051, China
Department of Clinical Laboratory, Hebei Provincial People's Hospital

【Abstract】 Objective To explore the value of combined detection of serum gastrin 17 (G17) and thymidine kinase 1 (TK1) in the diagnosis of gastric cancer. Methods Fifty patients with gastric cancer (gastric cancer group) , 50 patients with chronic gastric ulcer (gastric ulcer group) , 50 patients with chronic gastritis (gastritis group) and 50 healthy subjects (control group) who were admitted to our hospital from March 2018 to March 2019 were enrolled as research subjects. The levels of fasting serum G17 were detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) , and serum TK1 levels were detected by chemiluminescence combined with dot blot hybridization. The differences in serum G17 and TK1 levels were observed and compared among the 4 groups. The receiver operating characteristic (ROC) curve was used to evaluate the diagnostic efficacy of simple detection or combination detection of serum G17 and TK1 levels in diagnosis of gastric cancer. Results The serum levels of G17 and TK1 in gastric cancer group were significantly higher than those in the other three groups (P<0.05) . Pearson correlation analysis showed a significant positive correlation between serum G17 level and TK1 level (P<0.05) . The AUC of the ROC curve for the diagnosis of gastric cancer with serum G17 and TK1 levels were 0.886 (95%CI: 0.839～0.934) , 0.890 (95%CI: 0.850～0.930) , and 0.872 (95%CI:0.807～0.936) , respectively. The optimal thresholds for the diagnosis of gastric cancer by serum G17 and TK1 were 15.63 pmol/L and 2.10 pmol/L, respectively, the sensitivity was 82.0% and 68.0%, and the specificity was 78.7% and 94.7%, respectively. In addition, the coincidence rate was 79.5% and 88.0%, the positive predictive value was 56.2% and 81.0%, respectively, and the negative predictive values were 56.2% and 89.9%, respectively. The sensitivity, specificity, coincidence rate, positive predictive value and negative predictive value of serum G17 and TK1 levels in the diagnosis of gastric cancer were 86.0%, 96.0%, 93.5%, 87.7% and 95.4%, respectively. Conclusion The serum levels of G17 and TK1 are good indicators for the diagnosis of gastric cancer. The combination detection of the two indexes can improve the diagnostic efficacy of gastric cancer, which is worthy of clinical application.

【Keyword】gastric cancer; gastrin 17; thymidine kinase 1; diagnosis;
subject working characteristic curve

据国家癌症中心于2017年公布《中国胃癌流行病学现状》称，胃癌已经成为我国第二大恶性肿瘤类型，2012年全球胃癌发病病理和死亡病例分别达95.1万例和72.3万例，而我国发病和死亡病例接近全球的50%[1]。胃癌患者的前期发病特征较为隐微，通常无特异的临床症状，且在病情进展过程中出现的症状与胃炎、胃溃疡相近，造成较大部分患者未予以重视相关症状，导致目前我国首次确诊的胃癌患者中早期胃癌占比较低，约20%，大多数患者在首诊时已是进展期，此时患者已经失去手术或者放化疗治疗的最佳时机，从而使胃癌患者总体5年生存率不足50%[2，3]。胃镜下胃黏膜活检是确定胃癌、胃溃疡的常用临床检测方法，但受到活检位置、深度和范围等因素影响结果存在较大差异[4]。而目前临床常用的胃癌相关肿瘤标志物多为非特异性相关抗原，如胃泌素17(gastrin17，G17)、胸苷激酶1(thymidine kinase 1, TK1)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)、癌抗原19-9(arcinoma antigen 19-9, CA19-9)等，但单项检查结果敏感度和特异度较差[5，6]。因此众多学者提出多指标联合检测胃癌的设想，旨在提高胃癌诊断的敏感性、特异性和符合率[5，6]。本研究以50例胃癌患者、50例胃溃疡患者、50例胃炎患者和50例健康对照者为研究对象，探讨血清G17与TK1水平联合检测在胃癌诊断中的应用价值。

1、资料与方法

1.1一般资料

选择2018年3月至2019年3月河北省人民医院收治的胃癌患者50例(胃癌组)、慢性胃溃疡患者50例(胃溃疡组)、慢性胃炎患者50例(胃炎组)和正常人50例(对照组)作为研究对象。胃癌组：男28例，女22例；年龄43～69岁，平均年龄(54.83±8.19)岁；高度分化12例，中度分化17例，低度分化21例；临床分期：Ⅰ期9例，Ⅱ期18例，Ⅲ期14例，Ⅳ期9例。胃溃疡组：男26例，女24例；年龄41～71岁，平均年龄(54.52±7.93)岁；合并上消化道出血12例；溃疡穿孔6例。胃炎组：男27例，女23例；年龄44～72岁，平均年龄(54.98±9.25)岁；慢性萎缩性胃炎12例，慢性浅表性胃炎38例。对照组：男29例，女21例；年龄42～68岁，平均年龄(54.69±7.86)岁。4组性别组成、年龄等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2纳入与排除标准

1.2.1纳入标准：

①经组织病理学检查确诊为原发性胃癌、胃溃疡、慢性胃炎及健康者；②无胃部手术或其他治疗史。

1.2.2排除标准：

①近30d内有抗生素、抑酸剂、抗炎药或胃黏膜保护类药物治疗；②非原发性胃癌或接受放化疗治疗的患者；③伴有其他恶性肿瘤；④伴有严重的心、肝、肾、脑等器质性病变者；⑤妊娠或哺乳期女性。

1.3检测方法

1.3.1样本采集：

所有研究对象禁食6h后，清晨空腹采集5ml外周静脉血置于肝素抗凝采血管中保存，3000r/mim离心10min分离上层血清，将所得标本置于-70℃冰箱中保存，待应用试剂盒检测G17和TK1水平。

1.3.2试剂与方法：

G17采用必欧瀚生物技术(合肥)有限公司生产的胃泌素17检测试剂盒(酶联免疫法ELISA)检测，检测设备为赛默飞世尔(上海)仪器有限公司生产的MultiskanFC型酶标分析仪；TK1采用华瑞同康生物技术(深圳)有限公司生产的胸苷激酶1(TK1)测定试剂盒(酶免疫点印迹化学发光法)检测，检测设备为该公司生产的CIS-2化学发光数字成像分析仪。以上检验过程严格按照试剂盒说明书和仪器操作手册进行。

1.4统计学分析

应用SPSS21.0统计软件，多组计量资料比较采用F检验，组间两两比较采用q检验，绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线，计算曲线下面积(area under curve, AUC)，评估G17和TK1对胃癌的诊断效能，P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.14组血清G17、TK1水平比较
4组血清G17和TK1水平比较，差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌组患者血清G17和TK1水平显著高于其他3组(P<0.05)，胃溃疡组患者血清G17和TK1水平显著高于胃炎组和对照组(P<0.05)；胃炎组和对照组血清G17和TK1水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.2血清G17和TK1水平相关性分析
Pearson相关性分析结果显示，血清G17水平与TK1水平呈显著正相关(r=0.681，P=0.000)。见图1。

2.3血清G17和TK1水平对急性胰腺炎早期诊断的ROC曲线分析
绘制血清G17和TK1水平对胃癌诊断的ROC曲线，AUC分别为0.886(95%CI：0.839～0.934)、0.890(95%CI：0.850～0.930)、0.872(95CI：0.807～0.936)。血清G17和TK1诊断胃癌的最佳阈值分别为15.63pmol/L和2.10pmol/L，灵敏度分别为82.0%和68.0%、特异度分别为78.7%和94.7%，符合率分别为79.5%和88.0%，阳性预测值分别为56.2%和81.0%，阴性预测值分别为56.2%和89.9%。以血清G17水平或TK1水平中任一符合G17水平≥15.63pmol/L、TK1水平≥2.10pmol/L作为联合诊断阳性标准，则此时灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值和阴性预测值分别达到86.0%、96.0%、93.5%、87.7%和95.4%。见表2，图2。

3、讨论

胃癌是我国发生例数最多的消化系统恶性肿瘤，同时也是我国致死率最高的消化道肿瘤，在全部恶性肿瘤中位居第二位，严重威胁我国居民生命健康。目前尚不完全清楚胃癌的发病机制，但流行病学研究显示胃癌发病与饮食习惯、生活习性、遗传和环境等诸多因素有关[7]。胃癌在人体中的发病过程相当长，但是早期胃癌通常无特异的临床症状，随病情进展可出现上腹饱胀、隐痛、食欲减退、恶心、嗳气、黑便、胃痛等症状，与胃炎、胃溃疡等疾病症状相似，大部分的时间很难通过影像仪器检测检查出来，如若未进行系统性检查有很大可能出现误诊，而与此同时肿瘤细胞正在快速的生长与转移，使得胃癌病情不断加重，延误治疗的最佳有效时间，导致治疗效果很难令患者感到满意。由于我国胃癌患者早期检出率较低，而到确诊时已有较大比例处于进展期，造成患者生存情况及预后较差，为此近年来我国卫生主管部门及越来越多的专家学者一致在呼吁对存在胃癌高危因素的人群进行早期胃癌筛查，以助于提早发现并采取有效的治疗措施，提高患者治疗满意度和存活率。

胃镜检查及病理活检是目前胃癌临床诊断的“金标准”，但是胃镜检查依赖设备和内镜医生经验，对于检查的位置和区域大小要求比较高，同时检查费用相对较昂贵、并具有一定痛苦，患者接受程度较差。在我国，胃镜只是被用于在具有一定胃癌风险的人群中进行定期随访检查。而上消化道钡餐造影效果不明显，阳性检出率低，且具有放射性，因此不推荐用于胃癌筛查[8]。目前临床上癌症筛查的主要思路是先采用非侵入性的方法(例如血液检查)，并通过一些特定的肿瘤标记物的实验检查，筛选出高危风险人群，然后对这部分人群进行有目的的进一步检查诊断[9]。

胃泌素是由位于胃窦和十二指肠近端黏膜G细胞合成和分泌一种胃肠道肽类激素，其主要生理功能为促进胃液分泌[10]。胃泌素具有多种类型，主要包括G17、G34、G14、G6、G52、G71，其中胃窦黏膜分泌的胃泌素主要为G17，十二指肠黏膜主要分泌G17和G34。研究显示，G17是由17个氨基酸残基组成的多肽，是进餐后血液中胃泌素的主要形式，刺激胃液分泌的能力较G34强5～6倍。G17还能够促进胃粘膜细胞增殖与分化，能够提示胃窦黏膜萎缩状况或者是否存在异常增殖[11]。有研究探讨胃癌及不同胃疾病患者血清G17水平的差异，结果显示胃癌、胃粘膜糜烂、胃溃疡患者血清G17水平显著高于浅表性胃炎患者[12]。G17具有抑制肿瘤细胞凋亡的作用，可促进蛋白分泌使得癌症细胞增殖、侵袭及转移等能力增强，在胃癌病变发生过程中起到重要作用，其表达程度越高，其肿瘤的恶化程度越高，加快胃癌病程发展[13，14]。本研究结果显示胃癌组和胃溃疡组血清G17水平显著高于胃炎组和对照组，且胃癌组血清G17水平显著高于胃溃疡组(P<0.05)。提示G17可能在胃癌的发生、发展过程中发挥促进作用。采用ROC分析探讨血清G17是否能够作为诊断胃癌的血清学指标，结果发现，当以血清G17水平≥15.63pmol/L作为诊断胃癌的cutoff值时，灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值和阴性预测值分别为82.0%、78.7%、79.5%、56.2%和92.9%，可见血清G17可作为胃癌诊断的无创性指标。

TK1又被称为细胞质胸苷激酶，与线粒体胸苷激酶(thymidine kinase 2, TK2)为同工酶，是胸苷激酶在细胞内的两种形式[15]。研究显示TK1是一种细胞周期S期依赖酶，与细胞增殖和DNA合成速度存在正相关关系。细胞G1期晚期TK1水平升高，在S期时达到峰值，G2期开始降低[16]。正常细胞中TK1极少释放到人体血液中，但对于异常增殖细胞，其细胞周期调控机制受到破坏，DNA合成增加，TK1水平呈异常升高[17]。当异常细胞出现坏死时，TK1可释放至外周血中，引起血清TK1水平升高[18]。因此推断通过检测血清TK1水平可进行恶性增殖病变筛查和治疗后的跟踪监测，目前已有关于TK1应用于乳腺癌[19]、非小细胞肺癌[20]、骨肉瘤[21]等恶性肿瘤早期诊断的报道。与此同时，有研究表明，TK1在胃癌病变发展分子机制中占有重要位置，与胃癌的临床分期存在密切关系，也可用TK1作为胃癌早期检验的监测指标之一[22]。本次研究结果显示，胃癌组和胃溃疡组血清TK1水平显著高于胃炎组和对照组，且胃癌组血清TK1水平显著高于胃溃疡组(P<0.05)。进一步的ROC分析发现，当以血清TK1水平≥2.10pmol/L作为诊断胃癌的cutoff值时，灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值和阴性预测值分别为68.0%、94.7%、88.0%、81.0%和89.9%，具有良好的应用价值。

本研究采用Pearson分析探究了血清G17水平和TK1水平之间的相关性，结果显示2个指标存在显著正相关性，提示二者在胃癌发生、进展过程中可能存在协同作用。在此基础上本研究又进一步分析血清G17和TK1水平联合诊断胃癌的效能，即受检者符合血清G17≥15.63pmol/L或TK1≥2.10pmol/L即判断为胃癌阳性，结果显示灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值和阴性预测值分别达到86.0%、96.0%、93.5%、87.7%和95.4%，较单独使用血清G17、TK1均提高。

综上所述，胃癌、胃溃疡和胃炎患者血清G17和TK1水平存在显著差异，这两项血清学指标可作为胃癌诊断的良好指标，两者联合检测能够有效提高胃癌诊断灵敏度、特异度和准确度，值得临床推广应用。

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