环氧合酶-2在肺癌及癌旁组织中的表达及与临床病理、预后的关系分析

丁姝婷 杨菁华 韩强

【摘要】目的：探讨环氧合酶-2(COX-2)在肺癌及癌旁组织中表达量及与临床病理、预后关系。方法：收集本院收治的108例非小细胞肺癌患者临床资料，蛋白免疫印迹法检测肺癌组织及其癌旁组织中COX-2表达量，依据肺癌组织COX-2免疫组化结果分为阳性组与阴性组，分析COX-2与临床病理特征、预后关系。结果：肺癌组织中COX-2表达水平及COX-2阳性率均明显高于其癌旁组(P<0.05)，阳性组淋巴结转移率高于阴性组(P<0.05)；阴性组3年平均生存时间、存活率明显高于阳性组(P<0.05)；COX-2阳性率>10%、肺癌Ⅳ期、淋巴结转移是非小细胞肺癌患者不良预后的危险因素。结论：COX-2表达量上升与淋巴结转移有关，COX-2可用于肺癌患者预后评估。

【关键词】肺癌；非小细胞肺癌；癌旁组织；环氧合酶-2；免疫组化；预后

[中图分类号]R563  [文献标识码]A  [文章编号]1674-9308(2020)20-0112-03

Expression of Cyclooxygenase-2 in Lung Cancer and Adjacent Tissues and Its Relationship With Clinicopathology and Prognosis

DING Shuting YANG Jinghua HAN Qiang Department of Pathology,

First Affiliated Hospital of China Medical University,Shenyang Liaoning 1100001,China

【Abstract】Objective:To explore expression quantity of cyclooxygenase-2(COX-2)in lung cancer and adjacent tissues and its relationship with clinicopathology and prognosis.Methods:The clinical data of 108 patients with non-small cell lung cancer(NSCLC)who were admitted to the hospital were collected.The expression quantity of COX-2 in lung cancer tissues and adjacent tissues was detected by Western blot.According to immunohistochemical results of COX-2 in lung cancer tissues,they were divided into positive group and negative group.The relationship between COX-2 and clinicopathological features,prognosis was analyzed.Results:The expression level and positive rate of COX-2 in lung cancer tissues were significantly higher than those in adjacent tissues(P<0.05).The lymph node metastasis rate in positive group was higher than that in negative group(P<0.05).The 3-year median survival time and survival rate in negative group were significantly higher than those in positive group(P<0.05).The positive rate of COX-2 higher than 10%,lung cancer at stage Ⅳ and lymph node metastasis were risk factors for poor prognosis in NSCLC patients.Conclusion:The increase of COX-2 expression quantity is associated with lymph node metastasis.COX-2 can be applied to evaluate prognosis of lung cancer patients.

【Key words】lung cancer；non-small cell lung cancer；adjacent tissue；cyclooxygenase-2；immunohistochemistry；prognosis

我国2015年新发肿瘤病例及死亡病例分别占全世界肿瘤新发病例的22%、死亡病例的27%,其中发病率最高的肿瘤是肺癌[1-2]。非小细胞肺癌目前治疗方式主要为手术治疗、放化疗等,但患者预后仍不理想[3]。环氧合酶为花生四烯酸代谢途径中的限速,环氧合酶-2(COX-2)是其亚型之一。COX-2属于诱导酶,当机体组织受到损伤或出现炎症时,COX-2表达量增加。COX-2在多种肿瘤组织中呈现出异常表达,有学者认为COX-2表达会影响乳腺癌患者预后[4]。本研究收集我院收治的108例非小细胞肺癌患者的临床资料,比较肺癌组织及其癌旁组织中COX-2表达情况,对COX-2表达与临床病理、预后关系进行分析,为临床评估肺癌患者预后提供参考依据。

1、资料与方法

1.1一般资料

收集2013年8月-2016年2月该院收治并经病理检查确诊为非小细胞肺癌并经手术治疗的108例患者临床资料进行回顾性分析。纳入标准：符合《原发性肺癌诊疗规范》中的NSCLC诊断标准[5]并经病理学证实者；年龄28~70岁。排除标准：小细胞肺癌者；伴有其他恶性肿瘤者；患有严重脏器功能衰竭者；术前进行放疗、化疗的患者；孕妇、哺乳期妇女；认知功能障碍、精神病患者；临床病例资料不全以及失访者。

1.2方法

蛋白免疫印迹检测法：采用TissueorCellTotalProteinExtractionKit提取非小细胞肺癌组织及其癌旁组织总蛋白，Bradford法调整蛋白浓度，经SDS-PAGE凝胶电泳、转PVDF膜，密封2h，加入兔抗人COX-2(1：500)孵育1h，TBST漂洗40min，加入HRP标记的二抗(1：500)孵育1h，TBST漂洗40min，ECL化学发光显示，收集影像，采用凝胶图像处理系统软件分析各组条带灰度值，依据相对灰度值进行统计学分析。免疫组化检测(SP法)[6]：非小细胞肺癌组织及其癌旁组织进行常规石蜡切片(4μm)，进行高压抗原修复，3%H2O2过氧化氢孵育15min灭活内源性过氧化物酶，加入血清室温孵育15min，加入COX-2一抗(1：100)4℃孵育过夜，再加入与生物素结合的二抗孵育3h，二氨基联苯胺显色，苏木精复染色、封片，镜检。用0.01mol/L的PBS作为一抗作为阴性对照组，剩余操作与上述相同。COX-2阳性率判定标准[7]：细胞质出现棕黄色颗粒则表示为阳性细胞。每张片子于400×视野随机选取4个，每个视野观察10个细胞中表现为阳性的细胞数目，取其均值用于计算阳性率，细胞阳性率>10%则视为阳性，反之为阴性。阳性率＝(阳性细胞数目/总细胞数目)×100%。

1.3随访

肺癌患者自入院治疗之日起，对患者进行3年门诊、电话随访，随访截止时间为2019年3月，共计随访36~49个月，平均随访时间(42.15±5.64)个月，观察、记录随访期间病情状况以及患者存活情况。

1.4统计学方法

采用SPSS20.0统计软件，计量资料表示为(x±s)，组间比较采用t检验；两组间性别、组织分型、淋巴结转移、术后复发等计数资料采用x2检验，组间临床分期、组织分化程度采用秩和检验；采用Kaplan-Meier法进行生存曲线分析，预后风险因素分析采用Logistic回归分析，检验水准α=0.05。

2、结果

2.1肺癌组织及癌旁组织中环氧合酶-2表达量比较

采用免疫印迹法对108例肺癌患者及其癌旁组织COX-2表达量进行检测，结果显示肺癌组织中的COX-2表达量为(0.85±0.22)明显高于其癌旁组织的(0.31±0.14)(t=21.520，P=0.000)。

2.2两组患者一般资料比较

采用免疫组化法对108例肺癌患者的癌组织进行COX-2阳性检测，结果显示癌组织中有70例为COX-2阳性，38例为COX-2阴性，COX-2阳性率为64.81%；癌旁组织中有41例为COX-2阳性，67例为COX-2阴性，阳性率为37.96%；癌组织COX-2阳性率明显高于癌旁组织阳性率(x2=15.586，P=0.000)，见表1。COX-2与肺癌病理特征比较结果显示，COX-2阳性组与COX-2阴性组肺癌患者的年龄、性别、肿瘤直径、临床分期、组织分型、组织分化程度、术后复发情况比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；COX-2阳性组肺癌患者的淋巴结转移率明显高于COX-2阴性组(x2=4.459，P=0.035)，见表2。

2.3两组患者生存情况比较

两组肺癌患者于本院治疗后进行定期门诊随访3年，记录两组患者3年内的存活情况，结果显示COX-2阳性组肺癌患者的3年存活率为42.86%、平均生存时间为(21.96±7.54)个月，COX-2阴性组肺癌患者的3年存活率为57.89%、平均生存时间为(30.00±7.18)个月，差异具有统计学意义(t=5.336，P<0.001)，见图1。

2.4肺癌不良预后危险因素Logistic回归分析

以肺癌患者生存结局为因变量(死亡为"1"，存活为"0")，以肺癌患者COX-2阳性表达率(COX-2阳性率>10%为"1"，≤10%为"0")、年龄(≥60岁为"1"，<60岁为"0")、性别(男性为"1"，女性为"0")、癌症分期(Ⅰ期为"1"，Ⅱ期为"2"，Ⅲ期为"3"，Ⅳ期为"4")、淋巴结转移为自变量(转移为"1"，未转移为"0")为自变量，进行Logistic回归分析，结果显示年龄、性别均不是肺癌患者不良预后的危险因素(P>0.05)，COX-2阳性率>10%、肺癌Ⅳ期以及淋巴结转移是肺癌患者不良预后的危险因素(P<0.05)，见表3。

3、讨论

肺癌是发病率、死亡率均高的恶性肿瘤，我国肺癌发病率及死亡率居于恶性肿瘤第一，对人们的生命健康存在着巨大威胁[8]。肺癌患者预后与体免疫能力、营养状况、淋巴结转移情况、术后手否辅助化疗多种因素有关[9-10]。随着分子生物在肿瘤方面的研究深入，发现了多种与肿瘤发生、进展有关的基因及蛋白，这些基因、蛋白不仅对肿瘤进展情况有重要的评估、诊断价值，还具有对肿瘤患者治疗效果、预后进行预测的价值，可以通过这些基因、蛋白表达情况，为临床治疗方案的制定提供参考依据[11]。

COX-2是花生四烯酸生成前列腺过程中的限速酶，参与机体多种病理机生理反应[12]。COX-2也属于诱导性酶，在炎症、肿瘤组织中呈现出高表达[13]。本研究收集了108例非小细胞肺癌患者手术切除的肺癌组织及其癌旁组织，并用免疫印迹法与免疫组化法检测组织COX-2水平，结果显示COX-2在肺癌组织中的表达量显著高于癌旁组织，同时免疫组化结果也表明癌组织中的COX-2阳性率明显高于癌旁组织。张蕊等[14]研究发现COX-2在直肠癌组织及其癌旁组织中表达量存在差异，其高表达可促进直肠癌进展，与直肠癌患者不良预后相关。与本研究结果相似。

本研究结果显示肺癌组COX-2阳性表达与患者的淋巴结转移有关，并且COX-2阳性表达肺癌患者的3年总生存率明显低于COX-2阴性组患者，Logistic回归分析显示COX-2阳性率>10%、Ⅳ期及淋巴结转移是患者不良预后的危险因素。COX-2可以促进前列腺素E2含量增加，前列腺素E2可以通过抑制巨噬细胞等免疫细胞活性来抑制机体免疫反应，还具有抗纤维化的作用以阻碍正常细胞组织病理修复能力，有利于肿瘤细胞侵袭转移[15-16]。COX-2还可以影响MAPK/E2F-1、AKt/GSK-3β等途径活化，调节与细胞转移相关的基因蛋白(MIG-7、EP4、小细胞肺癌β1整联蛋白)表达来影响癌细胞的侵袭转移[17-18]。本研究结果表明COX-2阳性表达与肺癌细胞的转移有关，可与作为患者不良预后的评估指标。

综上所述，COX-2在非小细胞肺癌组织的表达量高于癌旁组织，COX-2阳性表达与患者的淋巴转移有关，并且对非小细胞肺癌患者不良预后具有一定的评估价值。但本文也存在收集样本较少、随访时间不长的不足，在以后的研究中需要增加样本量、延长随访时间，为临床评估非小细胞肺癌患者不良预后提供参考指标。

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(中国继续医学教育第12卷第20期)

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