miR-92b在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

张文静1 马君2 许弘邦3

【摘要】目的：探讨miR-92b在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义。方法：选取2012年4月至2014年4月在山东省立第三医院行手术切除的非小细胞肺癌患者103例，实时荧光定量PCR术检测非小细胞肺癌和癌旁组织中miR-92b表达，所有患者从术后第1d起随访至2019年4月30日，记录患者5年生存率及总生存时间，采用Kaplan-Meier法进行生存分析，采用Cox比例风险模型对影响预后的因素分析。结果：miR-92b在非小细胞肺癌组织中表达量为(2.31±0.15)，高于癌旁组织中的(1.01±0.10)(t=85.839，P＜0.001)；与TNM分期Ⅰ期和未发生淋巴结转移的患者相比，miR-92b在TNM分期Ⅱ～Ⅲ期和发生淋巴结转移患者组织中表达量升高(P＜0.05)；生存分析结果显示，低表达组5年累积生存率为57.69%，平均生存时间为(46.46±3.45)个月，均高于高表达组，分别为19.48%和(28.00±2.19)个月(x2=13.395，P＜0.001)；影响非小细胞肺癌患者预后的风险因素包括TNM分期、淋巴结转移和miR-92b表达[HR=2.409(95%CI:1.294～4.486)、3.055(95%CI:1.620～5.759)和2.069(95%CI:1.045～4.096)，P＜0.05]。结论 miR-92b在非小细胞肺癌组织中表达量升高，是患者5年生存率和生存时间的独立风险因素。

【关键词】非小细胞肺癌；miR-92b；临床病理指标；5年生存率；Cox比例风险模型

Expression of miR-92b in non-small cell lung cancer and its clinical significance

ZHANG Wen-jing1,MA Jun2,XU Hong-bang3

1.the Third Shandong Provincial Hospital,Jinan,Shandong 250031,China;

2.Dongying People's Hospital,Dongying,Shandong 257091,China;

3.Linyi Central Hospital,Linyi,Shandong 276000,China

【Abstract】Objective To investigate the expression and clinical significance of miR-92b in non-small cell lung cancer.Methods 103 patients with non-small cell lung cancer who underwent surgical resection in the Third Shandong Provincial Hospital were selected from April 2012 to April 2014.The expressions of miR-92b in on-small cell lung cancer and adjacent tissues were detected by real-time fluorescence quantitative PCR.All patients were followed up from 1d after surgery.Follow-up deadline was April 30,2019.Taking death as the end event,the 5-year survival rate and total survival time were recorded.Kaplan-Meier method was used for survival analysis,and Cox pro-portional hazard model was used for multivariate analysis affecting patient prognosis.Results The expression level of miR-92b in non-small cell lung cancer tissue was (2.31±0.15),which was higher than (1.01±0.10) in the adja-cent tissue (t=85.839,P＜0.001).Compared with patients with TNM stage Ⅰ and no lymph node metastasis,the expression level of miR-92b was increased in tissues of patients with TNM stageⅡ～Ⅲand lymph node metastasis (P＜0.05).Kaplan-Meier analysis showed that the 5-year cumulative survival rate was 57.69%,and the average survival time was (46.46±3.45) months in the low-expression group,while in the high-expression group were 19.48% and (28.00±2.19) months,respectively,the difference was statistically significant (x2=13.395,P＜0.001)．Cox proportional hazard analysis showed that TNM staging,lymph node metastasis,and the expression of miR-92b were independent risk factors affecting the prognosis of patients with non-small cell lung cancer [HR=2.409(95%CI:1.294～4.486),3.055 (95%CI:1.620～5.759) and 2.069 (95%CI:1.045～4.096),P＜0.05].Conclusion The expression level of miR-92b is increased in non-small cell lung cancer tissue,and it is related to malignant pathological characteristics and poor prognosis．It is an independent risk indicator that affects the 5-year survival rate and survival time of patients．

【Key words】non-small cell lung cancer;miR-92b;clinicopathological indicators;5-year survival rate;Cox proportional hazard model

肺癌作为呼吸系统高发恶性肿瘤，发病率和死亡率均高居我国恶性肿瘤首位，且发病率呈不断升高趋势[1]，对人群生命安全构成严重威胁，已成为我国重要的公共卫生问题。其中，非小细胞肺癌是最为常见的类型，约占肺癌的85%左右[2]，且该类型的肺癌早期缺乏典型症状，在我国有超过2/3的患者临床确诊时已无法进行手术治疗[3]，患者总体预后较差，5年生存率较低[4]。因此，积极探讨影响非小细胞肺癌患者预后的相关机制，寻找诊疗的敏感基因，对改善患者预后，提高生存率，具有重要意义。微小RNA(micro RNA，miRNA)作为广泛存在于真核生物体内的高度保守的小分子非编码RNA，可通过调控miRNA降解或抑制功能蛋白翻译，而在细胞增殖、分化、生长、凋亡等生理过程中发挥重要作用，近年来研究发现[5]，其与恶性肿瘤发生、进展、侵袭、转移过程密切相关[6]。miR-92b作为miR-NA重要类型，已有研究表明其参与了恶性肿瘤发生及进展[7]。本研究分析了非小细胞肺癌组织中miR-92b表达，探讨其与临床病理指标相关性及对患者预后的影响。

资料与方法

一、临床资料

选取2012年4月至2014年4月在山东省立第三医院接受手术治疗的非小细胞肺癌患者，纳入标准：①均在术前完善相关检查，具体手术适应症，未接受任何治疗，术后病理检查确证是非小细胞肺癌；②临床资料完整。共纳入103例，男性62例，女性41例，年龄36～74岁，平均(58.82±8.6)岁，组织学类型：鳞癌41例，腺癌62例；肿瘤直径：＞3cm 38例，≤3cm 65例；TNM分期：Ⅰ期46例，Ⅱ期38例，Ⅲ期19例； 58例出现淋巴结转移。留取非小细胞肺癌组织及距离肿瘤边缘在5cm以上的癌旁组织，保存于液氮中。本研究通过山东省立第三医院伦理委员会批准，所有患者均行知情同意。

二、方法

1.主要试剂和设备

Trizol总RNA提取试剂盒购自美国Invitrogen公司，反转录试剂和PCR扩增试剂盒购自宝生物工程(大连)有限公司，引物序列由上海权阳生物科技有限公司，StepOnePlus型实时荧光定量PCR仪购自美国ABI公司。

2.实验方法 取组织，剪碎、研磨，细胞裂解液裂解，用总RNA提取试剂盒提取总RNA，并检测其纯度，合格标准：A260/A280位于1.80～2.20。使用反转录试剂盒将总RNA反转录为cDNA，条件：30℃10min，95℃5min。按PCR扩增试剂盒说明，以cDNA为模板，用实时荧光定量PCR仪对引物进行扩增，引物序列：miR-92b：上游：5'-AGGGACGGGACGCGGTGCAGTG-3'，下游：5'-GCGAGCACAGAATTAATACGAC-3'；U6：上游：5'-CTCGCTY-CGGCAGCAC-3'，下游：5'-AACGCTTCACGAATTT-GCGT-3'。反应条件：94℃2min，94℃30s，58℃30s，72℃30s，循环38次。用2-ΔΔCt法计算非小细胞肺癌和癌旁组织中miR-92b表达量[8]。

3.病例随访 于术后第1d起对患者进行随访，包括住院期间查房，以及出院后门诊复诊、电话、病历追踪等。截止日期2019年4月30日，患者死亡时终止随访，其余患者均随访满5年(60个月)，记录患者5年内发生死亡事件数及生存时间。

三、统计学方法

使用SPSS 13.0软件分析，计量资料采用均数±标准差(±s)表示，组间比较采用t检验，采用Kaplan-Meier法进行生存分析，采用Cox比例风险模型对影响预后的多因素进行分析，P＜0.05差异有统计学意义。

结果

一、非小细胞肺癌和癌旁组织中miR-92b表达miR-92b在非小细胞肺癌组织中表达量为(2.31±0.15)，而在癌旁组织中则为(1.01±0.10)，差异有统计学意义(t=85.839，P＜0.001)。

二、不同临床病理指标的非小细胞肺癌患者组织中miR-92b表达miR-92b在不同年龄、性别、是否吸烟、不同组织学类型和肿瘤直径的非小细胞肺癌患者组织中的表达量间差异无统计学意义(P＞0.05)，与TNM分期Ⅰ期和未发生淋巴结转移的患者相比，miR-92b在TNM分期Ⅱ～Ⅲ期和发生淋巴结转移患者组织中表达量升高(P＜0.05)(见表1)。

三、非小细胞肺癌患者组织中miR-92b表达量与预后的相关性103例非小细胞患者随访期间死亡71例，随访时间1～60个月，中位随访时间，以miR-92b在非小细胞肺癌患者组织中表达量的P25值为界值，患者分为低表达组(n=26)和高表达组(n=77)，生存分析结果显示，低表达组5年累积生存率为57.69%，平均生存时间为(46.46±3.45)个月，高表达组分别为19.48%和(28.00±2.19)个月，差异有统计学意义(x2=13.395，P＜0.001)(见图1)。

四、影响非小细胞肺癌患者预后的相关因素

变量赋值(见表2)。结果显示，TNM分期、淋巴结转移和miR-92b表达是影响非小细胞肺癌患者预后的风险因素(HR=2.409、3.055和2.069，P＜0.05)(见表3)。

讨论

近年来，虽然新的诊疗技术不断应用于临床，但由于多数非小细胞肺癌患者发现时已进展至中晚期，治疗效果依然不佳，预后生存率较低[9]。因此，积极寻找有助于非小细胞肺癌患者早期诊疗的分子学指标及治疗靶点，对患者早期诊断及改善预后具有重要意义。随着研究深入，miRNA在恶性肿瘤发生、进展、侵袭和转移中的作用越来越被重视[10]。有研究指出[11]，非小细胞肺癌患者组织中存在miRNA表达谱异常。miR-92b是miR-106a-363基因簇成员之一，有研究指出[12]，其在食管鳞状细胞癌组织中表达异常，且与病理分级强烈相关。王宇等[13]指出，神经胶质瘤组织中miR-92b表达量显著增加，且与肿瘤细胞生物学功能有关。Wu等[14]研究发现，miR-92b失调与骨肉瘤有关，在骨肉瘤组织中表达上调，且与晚期肺转移和淋巴结转移有关。本研究结果显示，miR-92b在非小细胞肺癌组织中的表达量高于癌旁组织，说明miR-92b在非小细胞肺癌组织中呈高表达。本研究结果显示，与TNM分期Ⅰ期和未发生淋巴结转移的患者相比，miR-92b在TNM分期Ⅱ～Ⅲ期和淋巴结转移的组织中表达量明显升高，说明miR-92b表达可能与恶性进展的临床病理指标有关。

Zhou等[15]指出，miR-92b高表达与胆管癌患者不良结局有关。Wang等[16]研究指出，miR-92b过表达与肝细胞癌预后较差有关。本研究结果显示，低表达组患者5年累积生存率和平均生存时间均高于高表达组，说明miR-92b表达量与非小细胞肺癌患者预后有关，miR-92b高表达可影响患者5年累积生存率及生存时间。多因素分析结果进一步说明miR-92b高表达是影响非小细胞肺癌患者预后的风险因素，提示miR-92b可能是评估非小细胞肺癌预后的潜在生物学标志物，但miR-92b具体是如何参与非小细胞肺癌发生、进展过程，以及如何对患者生存时间产生影响，尚需进一步开展相关实验研究予以明确。

综上所述，miR-92b在非小细胞肺癌组织中表达量升高，且与不良预后有关，是影响预后的独立风险指标，有望成为患者预后评估的潜在标志物，但具体机制有待开展相关的实验研究进行验证。

参考文献

[1]郑荣寿，孙可欣，张思维，等.2015年中国恶性肿瘤流行情况分析[J].中华肿瘤杂志，2019，41(1)：19－28．

[2]谷瑞雪，邢影，蔡莉.ALK抑制剂治疗非小细胞肺癌的研究进展[J].中国肿瘤，2019，28(2)：126－131．

[3]IZUMI H，KODANI M，KURAI J，et al.Nivolumab-induced cholan-gitis in patients with non-small cell lung cancer： case series and a review of literature[J].Mol Clin Oncol，2019，11(5)：439－446．

[4]DENG H Y，HOU L，ZHA P，et al.Sarcopenia is an independent unfavorable prognostic factor of non-small cell lung cancer after surgical resection： a comprehensive systematic review and meta-a-nalysis[J].Eur J Surg Oncol，2019，45(5)：728－735.

[5]SABRY R，YAMATE J，FAVETTA L，et al.MicroRNAs： potential targets and agents of endocrine disruption in female reproduction[J].J Toxicol Pathol，2019，32(4)：213－221.

[6]YIN Y，LONG J，HE Q，et al.Emerging roles of circRNA in formation and progression of cancer[J].J Cancer，2019，10(21)：5015－5021.

[7]LONG M，ZHAN M，XU S，et al.miR-92b-3p acts as a tumor sup-pressor by targeting Gabra3 in pancreatic cancer[J].Mol Cancer，2017，16(1)：167.－180.

[8]刘郁，耿加敏，段绍斌.长链非编码RNA-ATB在结直肠癌组织中表达及临床意义[J].中国实验诊断学，2020，24(2)：312－315.

[9]CHEN B，GAO T，YUAN W，et al.Prognostic value of survival of microRNAs signatures in non-small cell lung cancer[J].J Cancer，2019，10(23)：－5804.

[10]LI M，HUO X，DAVULJIGARI C B，et al.MicroRNAs and their role in environmental chemical carcinogenesis[J].Environ Geo-chem Health，2019，41(1)：225－247.

[11]李丽琴，许丽敏，李静，等.肺癌、癌旁组织及正常组织中微小RNA表达谱的检测[J].中华实验外科杂志，2015，32(2)：409－410.

[12]WANG W，FU S，LIN X，et al.miR-92b-3p functions as a key gene in esophageal squamous cell cancer as determined by co-expression analysis[J].Onco Targets Ther，2019，12(10)：8339－8353.

[13]王宇，康鹏.miR-92b对神经胶质瘤细胞U251增殖及迁移侵袭的影响[J].神经疾病与精神卫生，2017，17(9)：618－622，后插1.

[14]WU Q，ZHOU W，FENG Q，et al.MicroRNA-92b promotes cell proliferation and invasion in osteosarcoma by directly targeting Dickkopf-related protein 3[J].Exp Ther Med，2018，15(1)：173－181.

[15]ZHOU M H，ZHOU H W，LIU M，et al.The role of miR-92b in cholangiocarcinoma patients[J].Int J Biol Markers，2018，33(3)：293－300.

[16]WANG J，ZHAO H，YU J，et al.MiR-92b targets p57kip2 to modu-late the resistance of hepatocellular carcinoma (HCC) to ionizing radiation ( IR) -based radiotherapy[J].Biomed Pharmacother，2019，110：646－655.

(临床肺科杂志 2021年3月第26卷第3期)

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