胃癌组织中长链非编码RNA FOXC2-AS1及清道夫受体B组1型分子的表达及临床意义

杨文斌，张建文，杨钊(湖南省郴州市第一人民医院 胃肠外科，湖南 郴州 423000)

【摘要】目的：研究胃癌患者癌组织中长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)FOXC2-AS1及清道夫受体B组1型分子(scavenger receptor class B typeⅠ，SCARB1)的表达及其临床意义。方法：选择2016年5月至2017年9月湖南省郴州市第一人民医院收治的96例胃癌患者，采用实时荧光定量PCR检测癌组织中FOXC2-AS1和SCARB1的表达，以癌旁正常组织为对照，分析癌组织中FOXC2-AS1、SCARB1表达与临床病理特征的关系，Pearson法分析FOXC2-AS1与SCARB1的相关性。Kaplan-Meier法(Log-rank检验)分析不同FOXC2-AS1、SCARB1表达水平患者的预后差异。结果：与癌旁正常组织相比，癌组织中FOXC2-AS1表达水平明显较高，SCARB1表达水平明显较低。不同肿瘤分期、病理分级癌组织中FOXC2-AS1、S-CARB1的表达差异具有显著性(P＜0.05)。癌组织中FOXC2-AS1和SCARB1的表达呈显著负相关(r=-0.663，P=0.000)。高FOXC2-AS1表达组患者3年总体生存率明显低于低FOXC2-AS1表达组患者，低SCARB1表达组患者3年总体生存率明显低于高SCARB1表达组患者(P＜0.05)。结论 胃癌组织中FOXC2-AS1表达升高，SCARB1表达降低，二者均与肿瘤TNM分期、病理分级有关，可作为判断胃癌预后的肿瘤标志物。

【关键词】胃癌；长链非编码RNA；清道夫受体B组1型分子；TNM分期

[中图分类号] R735.2          [文献标识码] A          [文章编号] 1008-1070(2021)06-0609-05

Relationship between long-chain non-coding RNA FOXC2-AS1，scavenger receptor class B typeⅠ expression and clinicopathological parameters and prognosis in patients with gastric cancer

Yang Wenbin， Zhang Jianwen，Yang Zhao (Department of Gastrointestinal Surgery，Chenzhou First People's Hospital，Hunan Chenzhou 423000，China)

【Abstract】Objective To study the expression and clinical significance of long non-coding RNA FOXC2-AS1(LncRNA FOXC2-AS1) interacting protein (DAB2IP) and scavenger receptor group B type 1 molecu-le (SCARB1) in cancer tissues of patients with gastric cancer.Method Real-time fluorescence quantitative PCR was used to detect the expression of LncRNA FOXC2-AS1 and SCARB1 in the cancer tissues of 96 patients with gastric cancer diagnosed and treated in Chenzhou first people's Hospital，and normal tis-sues adjacent to the cancer were used as controls.The relationship between LncRNA FOXC2-AS1 and S-CARB1 expression in cancer tissues and their correlation with clinicopathological characteristics were an-alysed statistically.The correlation between LncRNA FOXC2-AS1 and SCARB1 expression were analysed by Pearson linear correlation analysis.The prognosis of patients with different LncRNA FOXC2-AS1 and SCARB1 expression levels were analyzed by Kaplan-Meier survival analysis (Log-rank test).Result Com-pared with normal tissues adjacent to cancer， the level of LncRNA FOXC2-AS1 in cancer tissue was si-gnificantly higher， while the expression of SCARB1 was significantly lower. Patients with different tumor stages and pathological grades in the expression of FOXC2-AS1 and SCARB1 were statistically signific-ant (all P＜0.05).The expression of LncRNA FOXC2-AS1 and SCARB1 in cancer tissues was significant-ly negatively correlated (r=-0.663，P=0.000).The 3-year overall survival rate of patients in the high LncR-NA FOXC2-AS1 expression group was significantly lower than that of the patients in the low LncRNA FOXC2-AS1 expression group，and the 3-year overall survival rate of the patients in the low SCARB1 e-xpression group was significantly lower than that in the high SCARB1 expression group (all P＜0.05).C-onclusion The expression of LncRNA FOXC2-AS1 in gastric cancer tissue is increased，while the express-ion of SCARB1 is decreased.Both of them are related to tumor TNM staging and pathological grade，and may become new tumor markers for judging the prognosis of gastric cancer.

【Keywords】Gastric cancer；Long non-coding RNA；Scavenger receptor group B type 1 molecule；TNM sta-ge

胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一[1]。目前临床上胃癌的治疗方法主要包括手术治疗、放化疗及生物治疗等，但胃癌患者早期症状不明显，早期诊断率较低，当出现肝转移及腹膜转移时已为晚期，患者的生存质量及生存期不佳[2]。因此有必要深入研究胃癌发生发展的机制。长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)是长度为200～300个核苷酸的非编码RNA分子，可通过与微小RNA、蛋白等下游分子结合，对靶基因转录及转录后水平表达进行调控，参与正常细胞的发育、分化及衰老等生理及病理过程[3-4]。FOXC2-AS1作为一种lncRNA，其编码基因位于人类染色体16q24.1，该基因有两个外显子，长度为2617个核苷酸。近年来研究表明，FOXC2-AS1在骨肉瘤[5]、结肠癌[6]等肿瘤中均存在异常表达上调，并可通过激活钙离子-蛋白酪氨酸激酶2，促进肿瘤细胞的增殖及浸润能力，进而导致肿瘤进展。清道夫受体B组1型分子(scavenger receptor class B type Ⅰ，SCARB1)基因位于人类染色体12q24.31，该基因编码的蛋白质是高密度脂蛋白胆固醇的质膜受体，介导胆固醇向高密度脂蛋白胆固醇的转化。有研究表明，在结肠癌[7]、前列腺癌[8]等肿瘤中SCARB1表达水平降低。SCARB1作为胆固醇代谢过程中的关键抑制因子，可抑制雄激素(androgen receptor，AR)信号通路的活化，肿瘤中其表达水平的降低导致AR信号通路的过度活化，继而促进肿瘤进展。本研究通过研究胃癌患者癌组织中lncRNA FOXC2-AS1及SCARB1的表达，初步研究两者的临床价值。

1、资料与方法

1.1 临床资料 纳入2016年5月至2017年9月本院收治的96例胃癌患者。纳入标准：①经病理检查明确为胃癌；②初次诊治，既往无肿瘤治疗史；③临床病理及随访资料完整；④患者或家属已签署知情同意书。排除标准：①合并胃溃疡、慢性胃炎等消化道良性疾病；②合并肝肾等脏器功能障碍；③鳞状细胞癌、类癌等少见肿瘤类型。本研究经医院伦理委员会批准。所有患者均以门诊方式随访，随访内容为患者生存情况，随访截止时间为2020年9月，随访过程中无失访病例。

1.2 检测方法 手术过程中留取胃癌及距肿瘤边缘2cm以上的癌旁正常组织标本，标本离体30min以内置于-80℃冰箱保存。采用实时荧光定量PCR检测lncRNA FOXC2-AS1、SCARB1的表达。取约40mg癌及癌旁组织，Trizol法提取RNA，以RNA为模板，进行反转录，形成cDNA，分光光度计检测cDNA浓度和纯度，-20℃保存。以cDNA为模板，进行实时荧光定量PCR。各引物序列如下：lncRNA FOXC2-AS1上游5'-CCTCCTGGTATCTCAACCACA-3'，下游5'-GCCCCACATGATCTCACCC-3'；SCARB1上游5'-CCTATCCCCTTCTATCTCTCCG-3'，下游5'-GGATGTTGGGCATGACGATGT-3'；内参基因GAPDH上游5'-GAGGGTCGAGTTCTCAATCCC-3'，下游5'-ACGAAGCGATAGGTGGGGAT-3'。lncRNA FOXC2-AS1反应条件为：95℃2min；95℃20s，60℃20s，70℃20s，40个循环。反应体系：SYBR Green Master Mix 10µl，上游和下游引物分别1µl，cDNA 1µl，DEPC水1µl。GAPDH基因反应条件为：95℃预变性5min，95℃变性30s，62℃退火50s，72℃延伸10s，共40个循环。SCARB1反应条件为：60℃2min，94℃10min；94℃15s，62℃1min，40个循环。在ABI 7500PCR仪上完成。lncRNA FOXC2-AS1、SCARB1的相对表达量以2-ΔΔCt法表示。

1.3 统计学处理 应用SPSS 23.0软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差表示，两组间比较采用配对样本t检验；计数资料以率(%)表示，两组间比较采用卡方检验。lncRNA FOXC2-AS1与SCARB1的相关性采用Pearson法分析。Kaplan-Meier法(Log-rank检验)分析不同FOXC2-AS1、SCARB1表达水平患者预后差异。P＜0.05为差异有显著性。

2、结果

2.1 胃癌及其癌旁组织中lncRNA FOXC2-AS1、SCARB1表达 胃癌和癌旁组织lncRNA FOXC2-AS1的相对表达量分别为2.015±0.332、0.624±0.126，SCARB1的相对表达量分别为0.674±0.113、1.311±0.217。与癌旁组织相比，癌组织中lncRNA FOXC2-AS1的相对表达量明显较高(t=31.362，P=0.000)，而SCARB1的相对表达量明显较低(t=20.178，P=0.000)。

2.2 胃癌组织中lncRNA FOXC2-AS1、SCARB1 表达与临床病理参数的关系 不同肿瘤分期、病理分级的胃癌组织中FOXC2-AS1、SCARB1表达水平差异有显著性(P＜0.05)，而不同性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤位置、淋巴结转移之间差异无显著性(P＞0.05)。见表1。

2.3 胃癌组织中lncRNA FOXC2-AS1与SCARB1表达的相关性 Pearson分析结果显示，胃癌组织中lncRNA FOXC2-AS1与SCARB1的相对表达量呈显著负相关(r=-0.663，P=0.000)。见图1。

2.4 不同lncRNA FOXC2-AS1、SCARB1表达水平患者生存预后的差异 96例胃癌患者随访3～36个月，平均(26.2±3.1)个月，死亡27例，存活69例。以lncRNA FOXC2-AS1表达的平均值2.015为界，分为高lncRNA FOXC2-AS1表达组(50例)和低lncRNA FOXC2-AS1表达组(46例)，以SCARB1表达的平均值0.674为界，分为高SCARB1表达组(49例)和低SCARB1表达组(47例)。与高lncRNA FOXC2-AS1表达组比较，低lncRNA FOXC2-AS1表达组3年总体生存率较高[分别为54.0%(27/50)、91.3%(42/46)]，平均生存时间较长[分别为(18.4±2.7)个月、(24.4±3.3)个月]，差异均有显著性(x2=6.117，P=0.012；t=11.165，P=0.000)。与高SCARB1表达组比较，低SCARB1表达组3年总体生存率为较低[分别为89.8%(44/49)、53.2%(25/47)]，平均生存时间较短[分别为(25.1±3.3)个月、(19.2±3.1)个月]，差异均有显著性(x2=6.011，P=0.032；t=10.290，P=0.000)。

3、讨论

胃癌是全球第三大引起肿瘤特异死亡的恶性肿瘤，仅次于肺癌及肝癌。近年来随着早期诊断及治疗技术的发展，胃癌的发病率及死亡率有逐渐降低的趋势，但我国人口基数大，老龄人口多，胃癌疾病负担重，严重威胁着人民群众的生命健康[9]。目前认为，胃癌发病的危险因素包括幽门螺杆菌、吸烟史和家族遗传史等，但均不能完全解释胃癌的发病机制，因此，进一步深入研究胃癌的发病机制对其临床诊治具有重要意义。

lncRNA是无蛋白编码功能的RNA调控分子，长度为200～300个核苷酸。近年来研究发现，lncRNA不仅参与个体的发育、分化、衰老等正常生理过程，在自身免疫、感染及肿瘤等疾病中也发挥了重要的生物学调控的功能[10-11]。lncRNA FOXC2-AS1的编码基因位于人类16号染色体，在前列腺癌、乳腺癌等肿瘤中表达上调，可激活肿瘤细胞内钙离子-蛋白激酶2信号途径，引起肿瘤细胞的过度增殖，抑制凋亡，进而促使肿瘤的进展[12-13]。本研究发现，胃癌组织中lncRNA FOXC2-AS1表达升高，其机制尚不清楚，可能与肿瘤中促进lncRNA FOXC2-AS1表达的Wnt信号通路过度激活有关。ZHANG等[14]报道，肿瘤中Wnt信号通路激活后，Wnt信号通路蛋白1(WISP1)表达增加，而WISP1能够结合lncRNA FOXC2-AS1启动子区域，促进lncRNA FOXC2-AS1的表达。本研究中，肿瘤分期Ⅲ期、低分化胃癌组织中lncRNA FOXC2-AS1的表达升高，表明胃癌中lncRNA FOXC2-AS1的表达上调可能作为一种促癌基因，参与胃癌的发生发展过程。分析其原因，一方面是lncRNA FOXC2-AS1表达升高后能够招募多梳蛋白抑制复合体2(PRC2)到抑癌基因P15的启动子区域，并抑制P15的表达，促进肿瘤细胞的G0/G1期转换，使肿瘤细胞增殖加快，肿瘤分期升高[15]。另一方面，lncRNA FOXC2-AS1 能够促进肿瘤细胞间质转化，如N-钙黏素、波形蛋白表达上调，使肿瘤细胞易发生局部浸润，肿瘤分级升高[16]。本研究中，胃癌癌组织中lncRNA FOXC2-AS1高表达患者3年总体生存率低于低表达患者，表明lncRNA FOXC2-AS1高表达有助于判断胃癌患者的生存情况，有可能成为判断预后的标志物。

SCARB1基因位于人类12号染色体，其编码蛋白在正常肝脏组织、肾上腺、睾丸和卵巢等组织中表达水平较高，可参与调节胆固醇的摄取，促进胆固醇酯的储存，参与类固醇激素的合成[17]。研究表明，SCARB1在前列腺癌、黑色素瘤中表达下调，可激活癌基因MET，进而促使肿瘤的恶性进展[18]。本研究发现，胃癌组织中SCARB1的表达明显下调，其机制可能与微小RNA对SCARB1信使RNA的转录后调控有关。JAMALZEI等[19]与胡文佳等[20]的研究显示，miR-199能够结合到SCARB1信使RNA的3'非编码区，抑制SCARB1的表达，而肿瘤发生时miR-199的表达水平升高，导致SCARB1表达下调。另外，高分期和低分化癌组织中的SCARB1表达下调，表明胃癌组织中SCARB1的表达降低可促进胃癌的发生发展，其原因可能与肿瘤微环境中SCARB1的表达对CD8+T淋巴细胞免疫功能的调节有关。PLEBANEK等[21]的研究显示，正常细胞中的SCARB1能够通过结合高密度脂蛋白，激活髓源性抑制细胞的功能，发挥抑制T淋巴细胞的功能，而肿瘤发生时SCARB1表达下调，髓源性抑制细胞的功能过度活化，抑制CD8+T淋巴细胞的功能降低，从而导致肿瘤细胞增殖及恶性进展。本研究发现，癌组织中lncRNA FOXC2-AS1与SCARB1的表达呈显著负相关，其机制尚不清楚，可能与FOXC2-AS1能够通过表观遗传学修饰抑制SCARB1的表达有关。有学者发现，lncRNA FOXC2-AS1作为分子支架可结合多梳蛋白抑制物，促进SCARB1基因启动子的甲基化，导致SCARB1基因表达水平降低[12，22]，但胃癌中二者之间的相互作用及下游的关键作用靶点有待进一步深入研究。

综上所述，胃癌组织中lncRNA FOXC2-AS1表达上调，SCARB1表达水平下调，且二者均与肿瘤分期及病理分级有关，共同参与胃癌的发生发展，有可能成为判断胃癌患者预后的指标。

参考文献

[1]KARIMI P，ISLAMI F，ANANDASABAPATHY S，et al.Gastric cancer：descriptive epidemiology，risk fact-ors，screening，and prevention[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2014，23(5)：700-713.

[2]宋杰，陈凤格，赵伟，等.胃癌的发病率现状与治疗研究进展[J].中国慢性病预防与控制，2016，24(9)：704-707.

[3]PENG W X，KOIRALA P，MO Y Y.LncRNA-mediated regulation of cell signaling in cancer[J].Oncoge-ne，2017，36(41)：5661-5667.

[4]熊伟，张洪涛，杨之斌，等.LncRNA HCG11通过调控miR-144-3p/ZEB1分子轴影响直肠癌的发生及转移[J].中国肿瘤生物治疗杂志，2019，26(2)：173-181.

[5]张义，张擎柱，谷锐，等.lncRNA FOXC2-AS1逆转骨肉瘤细胞对阿霉素耐药性的影响[J].临床肿瘤学杂志，2019，24(5)：385-390.

[6]PAN K，XIE Y.LncRNA FOXC2-AS1 enhances FOXC2 mRNA stability to promote colorectal cancer progression via activation of Ca2+-FAK signal pathway[J].Cell Death Dis，2020，11(6)：434-461.

[7]刘惠苓.B类Ⅰ型清道夫受体的高表达是结肠癌患者的有利预后因素[D].济南：山东大学，2017.

[8]GORDON J A，NOBLE J W，MIDHA A，et al.Upregulation of scavenger receptor B1 Is required for st-eroidogenic and nonsteroidogenic cholesterol metabolism in prostate cancer[J].Cancer Res，2019，79(13)：3320-3331.

[9]董峰，马君俊，张鲁阳，等.TLR4/MyD88/NF-κB通路激活与胃癌患者临床病理特征及血清肿瘤标志物的相关性分析[J].中国医刊，2019，54(4)：385-388.

[10]张炜，魏珍星，郭洁，等.长链非编码RNA H19和沉默信息调节蛋白6在喉鳞状细胞癌中的表达及其与预后的关系[J].中国临床医生杂志，2020，48(6)：691-695.

[11]刘秋燕，熊伟，李程，等.长链非编码RNA在鼻咽癌中的研究进展[J].中国医药，2020，15(1)：157-160.

[12]CHEN Y，GU M，LIU C，et al.Long noncoding RNA FOXC2-AS1 facilitates the proliferation and progression of prostate cancer via targeting miR-1253/EZH2[J].Gene，2019，686(3)：37-42.

[13]YANG H，CHEN T，XU S，et al.Long noncoding RNA FOXC2-AS1 predicts poor survival in breast cancer patients and promotes cell proliferation[J].Oncol Res，2019，27(2)：219-226.

[14]ZHANG S，YUAN Y，ZHANG Z，et al.LncRNA FOXC2-AS1 protects cardiomyocytes from doxorubicin-induced cardiotoxicity through activation of WNT1-inducible signaling pathway protein-1[J].Biosci Biotec-hnol Biochem，2019，83(4)：653-658.

[15]SUN Z，HE C，XIAO M，et al.LncRNA FOXC2 antisense transcript accelerates non-small-cell lung cancer tumorigenesis via silencing p15[J].Am J Transl Res，2019，11(7)：4552-4560.

[16]蔡娟娟，崔艳梅，丁彦青，等.FOXC2对结直肠癌细胞上皮-间质转化及侵袭能力的影响[J].重庆医学，2016，45(11)：1444-1447.

[17]TRAUGHBER C A，OPOKU E， BRUBAKER G，et al.Uptake of high-density lipoprotein by scavenger receptor class B type 1 is associated with prostate cancer proliferation and tumor progression in mice[J].J Biol Chem，2020，295(24)：8252-8261.

[18]KINSLECHNER K，SCHÜTZ B，PISTEK M，et al.Loss of SR-BI down-regulates MITF and suppresses extracellular vesicle release in human melanoma[J].Int J Mol Sci，2019，20(5)：1063-1072.

[19]JAMALZEI B，KARAMI TEHRANI F S，ATRI M.Evaluation of LDL receptor and Scavenger Receptor，Class B，Type 1 in the malignant and benign breast tumors：The correlation with the expression of miR-199a-5p， miR-199b-5p and miR-455-5p[J].Gene，2020，749(4)：144-160.

[20]胡文佳，陈晨，黄辉，等.miR-199a家族与肿瘤关系的研究进展[J].医学综述，2019，25(2)：78-83.

[21]PLEBANEK M P，BHAUMIK D，BRYCE P J，et al.Scavenger receptor type B1 and lipoprotein nanoparticle inhibit myeloid-derived suppressor cells[J].Mol Cancer Ther，2018，17(3)：686-697.

[22]刘佳萱.MiR-185靶向SCARB1促进肝纤维化发生发展的研究[D].上海：海军军医大学，2018.

(中国医刊 2021年第56卷第6期)

本文内容由振东健康网整理发布