红花注射液对肾缺血再灌注损伤大鼠血清 ICAM-1表达的影响

刘 松 陈 萌
（南阳医学高等专科学校，河南 南阳，473000）
中图分类号：R692 文献标识码：A 文章编号：1674-7860（2018）31-0010-02 证型：DBG

【摘 要】 目的：研究红花注射液对肾缺血再灌注损伤（RIRI）大鼠血清 ICAM-1 水平的变化，探讨红花注射液对 RIRI 的保护机制。方法：将 30 只大鼠随机分为假手术组、RIRI 模型组和红花注射液剂量组（150 mg/kg），每天免疫球蛋白给药 1 次，连续 2 周。观察各组大鼠血清中细胞间黏附因子 1（ICAM-1）、肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）等的变化。结果：与假手术组比较，模型组大鼠血清中 Cr、BUN、MDA、ICAM-1 明显升高，GSH 明显降低，有显著性差异（P ＜0.05），与模型组比较，用药各组大鼠血清 Cr、BUN、MDA、ICAM-1 明显降低，GSH 明显升高，有显著性差异（P ＜ 0.05）。结论：红花注射液可能通过减少氧化应激的激活，减少血清 ICAM-1 水平，从而发挥对 RIRI 的保护作用。

【关键词】 红花注射液；缺血再灌注损伤；ICAM-1

Efficacy of the Honghua injection on expression of  ICAM -1 in rats with ischemia-reperfusion injury

【Abstract】 Objective: To investigate the efficacy of the Honghua injection ( 红花注射液 ) on expression of ICAM-1 in rats with ischemia-reperfusion injury. Methods: 30 SD rats were randomly divided into the sham group, model group, and the Honghua injection group. ICAM-1, Cr, BUN and MDA were observed. Results: Compared with the sham group, Cr, BUN, MDA and ICAM-1 were significantly increased in the model group and the Honghua injection group, and GSH was significantly decreased, with significant differences (P<0.05). Compared with the model group, Cr, BUN,MDA and ICAM-1 were significantly decreased in the Honghua injection group, and GSH was significantly increased, with significant differences (P<0.05). Conclusion: The Honghua injection can reduce the serum ICAM-1 level by reducing the activation of oxidative stress and thus exert the protective effect on RIRI.

【Keywords】 The Honghua injection; Ischemia-reperfusion injury; ICAM-1

doi:10.3969/j.issn.1674-7860.2018.31.004

肾缺血再灌注损伤（RIRI），指缺血的肾组织在恢复血液灌注后正常功能不能恢复，甚至发生组织损伤或导致器官功能衰竭，常见于肾移植、心衰、休克、严重烧伤等病理生理过程。目前关于 RIRI 的发生机制尚未完全研究清楚，但一般认为与自由基激活、钙超载、细胞凋亡等多种因素有关[1] 。血清 ICAM-1 可促进内皮细胞的损伤，与其他细胞因子的协同作用而加重肾脏缺血，红花注射液红花具有抗凋亡、抗凝、防止血栓形成和扩张血管等功效[2-4] ，有强效的清除自由基和抑制脂质过氧化的作用。

本研究中我们观察红花注射液对 RIRI 大鼠肾组织 ICAM-1 蛋白水平的影响，观察红花注射液对 RIRI 的保护作用。

1 材 料

1.1 动物

由河南康达实验动物有限公司提供，动物合格证号：SCXK（豫）2015-0004，健康清洁级 Wistar 大鼠 30 只，体质量 200 ～ 250g，基础饲料饲养。

1.2 药品与试剂

红花注射液（陕西方晟科技有限公司生产），肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）检测试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：20150629、20150220、
20150721、20141227）。

2 方 法

2.1 分组、造模与给药

选取 10 周龄清洁级 SD 雄性大鼠 30 只，体重 220 ～ 250g，将 30 只大鼠随机分为假手术组、模型组和红花注射液组（2.5mL/kg），每组 10 只。于造模前 1 周内，假手术组和模型组大鼠每天免疫球蛋白 1 次生理盐水，给药组大鼠每天免疫球蛋白 1 次，计量为 2.5mL/kg。给药 1 周后，模型组和各给药组大鼠按照文献[5,6] 中方法进行造模：造模前大鼠禁食不禁水 6h，麻醉，固定，手术暴露双侧肾脏，无创动脉夹把双侧肾动脉阻断 60min 复制 RIRI 模型；造模成功后缝合切口，涂抹红霉素软膏预防切口感染。假手术组大鼠处理、分离肾动静脉后，不夹闭肾动脉。

2.2 血清指标的测定

采用 ELISA 法检测血清中 ICAM-1 水平，采用全自动生化仪检测血清中 Cr、BUN 水平，采用考马斯蓝法测定血清中MDA、GSH 水平，各指标检测均按照相应试剂盒说明书进行操作。

2.3 统计学方法

采用 SPSS 20.0 统计软件进行数据分析。计量资料以（x+s）的方式表示，组间比较采用单因素方差分析和 LSD-t检验。P ＜ 0.05 表示差异有统计学意义。

3 结 果

3.1 血清中 ICAM-1 水平测定结果

与假手术组比较，模型组大鼠血清中 ICAM-1 水平明显升高（P ＜ 0.05）；与模型组比较，给药组大鼠血清中 ICAM-1水平明显降低，差异均有统计学意义（P ＜ 0.05）。假手术组、模型组和红花注射液组大鼠血清中 ICAM-1 水平依次为（21.05±3.02）ng/mL、（51.08±4.37）ng/mL、（31.43±3.02）ng/mL，n ＝ 10。

3.2 血清中 Cr、BUN 水平测定结果

与假手术组比较，其余各组大鼠血清中 Cr、BUN 水平明显升高（P ＜ 0.05）；与模型组比较，给药组大鼠血清中 Cr、BUN 水平明显降低，且红花注射液组大鼠血清中 Cr、BUN水平明显低于红花注射液组，差异均有统计学意义（P ＜0.05），结果见表 1。

3.3 血清中 MDA、GSH 水平测定结果
与假手术组比较，其余各组大鼠血清中 MDA 水平明显升高、GSH 水平明显降低（P ＜ 0.05）；与模型组比较，给药组大鼠血清中MDA水平明显降低、GSH水平明显升高，结果见表2。

4  讨 论

RIRI的发生与再灌注过程中氧自由基的产生有密切的关系，肾缺血时机体抗氧化系统功能减弱，产生大量的氧自由基，再灌注时组织血液和氧供应得到恢复，可引发氧自由基短时间内爆发性增多，引发对肾组织的破坏和功能代谢障碍。再灌注时产生的自由基可攻击细胞膜的多不饱和脂肪酸，可形成 MDA 等脂质过氧化物，GSH 为抗氧化酶，氧自由基的生成增加导致 GSH 消耗和水平降低。TRAF6 在氧自由基介导的细胞凋亡中发挥重要的作用，减少氧自由基的产生或减少TRAF6 蛋白的表达，均可降低氧自由基导致的细胞凋亡[7] 。

红花注射液由红花提取精制而成，红花性辛温，具有活血通经、祛瘀止痛的功效，其主要含有桑色素、槲皮素等成分[4] 。研究表明，红花具有抗凋亡、防止血栓形成、抗凝等功效

血清ICAM-1，作为一种跨膜单链高度糖化的整合膜蛋白，其表达异常可引起内皮细胞的损伤，通常，血清ICAM-1在肾脏的表达水平较低（不表达），但是一旦出现再灌注伤，就会增加它在血清中的表达水平。血清 ICAM-1 可促进内皮细胞的损伤，与其他细胞因子的协同作用而加重肾脏缺血。研究表明，红花注射液预处理对血清 ICAM-1 有抑制作用[8] 。可能通过抑制致炎性细胞因子分泌及血清 ICAM-1 的表达和增加抗炎性细胞因子分泌，从而发挥阻遏炎症级联反应，减轻毛细血管血流紊乱和内皮细胞损伤的作用[9] 。

本研究中，和假手术组比较，缺血再灌注组血清 MDA含量升高、GSH 含量下降、Cr、BUN 升高，红花注射液预处理组上述现象明显有改善，说明 RIRI 时可引发氧化应激的过度激活，抗氧化能力下降，肾功能受到损害，红花注射液对 RIRI 过程中的氧化应激过度激活具有抑制作用。本研究的结果还显示，RIRI 24h 后，缺血再灌注组 ICAM-1 水平较假手术组明显升高，而预处理组 ICAM-1 蛋白水平明显降低，推测红花注射液可能通过减少氧化应激的激活，减少血清中ICAM-1 的水平，从而发挥对 RIRI 的保护作用。

参考文献：

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[2]罗嘉,方治平,周黎明,等.红花注射液对大鼠局灶性脑缺血后梗死体积和神经元凋亡相关蛋白bcl-2,Caspase-3表达的影响[J].中国中药杂志,2004,29(10):977-980.

[3]刘秉乾,武玉东,马腾骧,等.血红素氧和酶-1对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用[J].中华实验外科杂志,2004,21(12):1531-1532.

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[5]Ping Yuan, Zhiqing Liu, Minghua Liu, et al. Up-regulated tumor necrosis factor-associated factor 6 level is correlated with apoptosis in the rat cerebral ischemia and reperfusion[J].Neurol Sci,2012,34(7):1133-1138.

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[8]Liu S, Lutz J, Chang J, et al. TRAF6 knockdown promotes survival and inhibits inflammatory response to lipopolysaccharides in rat primary renal proximal tubule cells[J].Acta Physiol,2010,199(3):339-346.

[9]Singh, A.P., A. Junemann, A. Muthuraman, et al. Animal models of acute renal failure. Pharmacol Rep,2012,64(1):31-44.

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