冠心宁注射液多次静脉给药对Beagle犬的毒性研究

程振田1，袁祥萍1，武复荣2，戴晓莉2
(1．潍坊市益都中心医院药学部，山东潍坊262500；2．山东省药学科学院新药评价中心，济南250100)

【摘 要】：目的研究冠心宁注射液连续13周静脉注射给予Beagle犬后产生的毒性。方法正常Beagle犬40只，分为对照组和低、中、高剂量实验组。低、中、高剂量实验组分别给予0.4，0.8，1.6g•kg－1的冠心宁注射液，对照组给予等容积的生理盐水，静脉注射，每天1次，连续注射13周。检测外观体征、体重、临床病理及毒性病理学各项指标，全面评价重复给予Beagle犬后产生的毒性。结果低剂量实验组动物未见任何毒性反应；中剂量实验组动物出现流涎、呕吐、血清谷丙转氨酶(ALT)升高；高剂量实验组动物出现流涎、呕吐、血清ALT、谷草转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)升高［ALT(86.7±17.2)U•L－1，AST(65.4±11.5)U•L－1，BUN(6.5±1.2)mmol•L－1)］，肝系数增加［(3.74±0.56)×10－2］，及肝和肾的病理组织学病变。结论冠心宁注射液连续13周静脉注射给予Beagle犬，主要毒性靶器官为肝和肾，其无毒性反应剂量为0.4g•kg－1•d－1，相当于成人临床用药剂量的6倍左右。

【关键词】：冠心宁注射液；Beagle犬；肾毒性；肝毒性

DOI：10.13699/j.cnki.1001－6821.2019.02.009

中图分类号：Ｒ28文献标志码：A

文章编号：1001－6821(2019)02－0126－03

Study of intravenous injection repeated dose toxicity of Guanxinning injection in Beagle dogs
CHENG Zhen － tian 1 ，YUAN Xiang － ping 1 ，WU Fu － rong 2 ，DAI Xiao － li 2
(1. Faculty of Pharmaceutical Sciences，Yidu Central Hospital of Weifang，Weifang 262500， Shandong Province，China; 2.New Drug Evaluation Center，Shandong Academy of Pharmaceutical
Sciences，Jinan 250100，China)

【Abstract】: Objective To investigate the repeated dose toxicity of Guanxinning injection in Beagle dogs. Methods Forty Beagle dogs were divided into control group and low，middle，high dose test groups. The dogs in low，middle，high dose test groups were administered intrave-nously with Guanxinning injection 0. 4，0. 8，1. 6 g•kg －1for 13 weeks，control group was given normal saline. The physical signs，body weight，clinicopathology and toxic － pathology were measured for toxicity assessment. Ｒesults No toxic reaction was found in low dose test group. Saliva，vomiting and abnormal escalation of the levels of alanine aminotransferase(ALT) were found in middle dose test group. The toxic reactions in high dose test group showed abnormal escalation of the levels of ALT，aspartate aminotransferase ( AST)，blood urea nitrogen ( BUN) ［ALT(86. 7 ±17. 2) U•L－1 ，AST(65. 4 ±11. 5) U•L －1 ，BUN(6. 5 ±1. 2)mmol•L－1 )］and liver index［(3. 74 ± 0. 56) × 10 －2 ］. Pathological changes of kidney and liver was also found by histopathological examination. Conclusion Guanxinning injection administered intravenously has significant toxicity on kidney，liver and drug delivery site. No observed adverse effect level is 0. 4 g•kg －1 •d －1 ，which is equivalent to about 6 times the dose of clinical medication in adults.

【Key words】: Guanxinning injection; Beagle dog; kidney toxicity; liver toxicity

冠心宁注射液是从丹参和川芎中提取的复方制剂，具有活血化瘀、通脉养心之功效，临床主要用于冠心病和心绞痛［1－2］。冠心宁注射液常见药物不良反应包括胃肠道反应、发热、烦躁、皮肤瘙痒等［3－4］。按照中药注射剂再评价要求，本实验室前期已开展了啮齿类动物多次给药毒性研究［5］，故本研究在药物非临床研究质量管理规范(GLP)条件下进行了Beagle犬13周多次给药毒性研究，为临床应用及药物不良反应检测提供参考。

材料与方法

1材料

动物Beagle犬，雌雄各20只，体重(7±1)kg，北京日新科技有限公司提供。动物许可证号：SCXK(京)2016－0004。

药品与试剂冠心宁注射液(主要成分：丹参和川芎)，临床病理检测试剂盒，由武汉默沙克生物科技有限公司提供。

仪器AU5800全自动生化分析仪，DxH800血细胞分析仪，ACL7000全自动凝血分析仪，均为贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司产品。

2方法

2.1剂量设计依据

冠心宁注射液成人临床用量为4.2g•d－1，犬的药效学等效剂量为0.112g•kg－1，成人按照60kg折算剂量为0.07g•kg－1。根据多次给药毒性实验的技术指导原则，多次给药毒性实验一般设高、中、低3个剂量实验组和1个对照组，高剂量为明显毒性反应剂量，低剂量为安全剂量，高低剂量之间按照毒性情况设立中剂量［6］。正式实验前进行了4周的预试验，结果显示，1g•kg－1剂量下出现呕吐、流涎，谷丙转氨酶(AST)、谷草转氨酶(ALT)轻度升高，0.4g•kg－1仅出现轻微呕吐和流涎症状。故正式实验高、中、低剂量实验组分别设计为1.6，0.8，0.4g•kg－1，分别为犬药效学等效剂量的16、8和4倍左右，成人临床用药剂量的23、11、6倍左右。

2.2动物分组与给药

健康成年Beagle犬40只，按体重大小均衡地分为对照组和高、中、低剂量实验组。高、中、低剂量实验组分别给予冠心宁注射液1.6，0.8，0.4g•kg－1，对照组给予等容积的生理盐水，静脉注射，每天1次，连续13周，恢复期设计为4周。

2.3指标检测

每次给药后仔细观察动物的外观体征，每周称量1次犬体重。首次给药前、给药13周结束及恢复4周结束时对动物进行心电图、体温和眼科检查，收集尿液和粪便进行常规检查，前肢静脉采血进行血液进生化及血液学检查［6－7］。给药13周结束每组取6只Beagle犬，恢复4周结束每组取4只犬，戊巴比妥钠安乐处死后剖检，取心、肝、脾、肺、肾和脑等主要脏器称重并计算脏器系数(脏器系数=脏器重量/体重×0.1)。所有脏器用4%甲醛溶液固定，进行常规病理组织学检查。

3.统计学处理

用DAS2.0进行统计分析。数据用珋x±s表示，组间比较用t检验。

结 果

1.各组外观体征观察结果

高剂量实验组动物静脉给药过程中出现流涎、呕吐、兴奋挣扎等情形，药后约30min才逐渐恢复，随着给药时间的延长兴奋挣扎逐渐消失，呕吐出现的时间延迟，给药期间未有动物死亡。中剂量实验组部分动物给药过程中出现流涎和呕吐，未见其他异常反应。低剂量实验组和对照组动物未出现任何异常反应。

2.各组体重、眼科、体温、心电、粪便和尿液检查结果

实验期间所有Beagle犬体重平稳增长，给药13周后和恢复4周结束心电各项指标、体温、眼科检查、粪便和尿液常规检查，3个剂量实验组与对照组比较差异均无统计学意义。说明冠心宁注射液1.6g•kg－1以下对Beagle犬上述检测指标均无明显毒性作用。

3.各组血液学及血液生化学结果结果

与对照组比较，高、中、低剂量实验组在给药前、给药13周及恢复4周时血液学指标差异无统计学意义；给药13周结束时高剂量实验组犬血清中AST、ALT和尿素氮(BUN)水平明显升高(P＜0.01或P＜0.05)，中剂量实验组中犬血清中ALT水平升高(P＜0.05)，而低剂量实验组犬的血液生化学指标未见明显异常。高、中剂量实验组出现的异常指标停药

4.周后可恢复到正常水平。异常指标，见表1。

各组脏器系数比较高剂量实验组动物给药结束时肝系数为(3.74±0.56)×10－2，而对照组肝系数为(2.75±0.35)×10－2，差异有统计学意义(P＜0.05)，停药4周后恢复正常［(3.23±0.44)×10－2］；中、低剂量实验组动物肝系数分别为(3.04±0.21)×10－2和(2.85±0.30)×10－2，均未见增大。

ALT: Alanine aminotransferase; AST: Aspartate aminotransferase; BUN: Blood urea nitrogen; Control: Normal saline; Low，middle，high dose test groups:0. 4，0. 8，1. 6 g•kg－1;*P ＜0. 05，＊＊ P ＜0. 01，vs control group

5.各组大体病理及组织形态学检查结果

所有Beagle主要脏器解剖肉眼观察未见异常。病理组织学检查结果显示，高剂量实验组给药结束剖检的6只动物中3只出现肝病变，2只出现肾病变，表现为肝细胞水肿，体积增大，胞浆内充满细小的红染颗粒，部分肝细胞变性、坏死，胞核消失，肝细胞成弥散性水肿；肾毛细血管扩张充血，部分肾小管上皮细胞变性、坏死或发生固缩。中、低剂量实验组未见与药物有关的病理组织学病变。高剂量实验组的肝和肾病变停药4周后可恢复。病变组织切片，见图1。

图1肝和肾病理组织切片图(HE染色)

Figure 1 Histological changes of liver and kidney in Beagle dogs (HE staining)A: Liver of control group; B: Liver of high dose test group; C: Kidney of control group; D: Kidney of high dose test group

讨  论

非啮齿类动物多次给药毒性实验是中药注射液临床前再评价工作中必须开展的内容之一，长时间较高剂量下多次静脉注射给药，能够尽可能暴露中药注射液可能引起的药物不良反应和毒性靶器官，预测临床应用中药物不良反应发生的性质和程度［8－10］。本研究结果提示，冠心宁注射液连续13周静脉注射给予Beagle犬，主要毒性靶器官为肝和肾，其无毒反应剂量为0.4g•kg－1•d－1，相当于成人临床用药剂量的6倍左右，犬药效学等效剂量的4倍左右，肝肾毒性停药后可恢复，结果提示临床应用中应密切检测肝肾功能，一旦发现肝肾毒性应停止用药。

参考文献：

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